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ICS 11.020 C 50

WS

中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 224—2018

代替 WS/T 224—2002

真空采血管的性能驗(yàn)證

Performance verification of vacuum tubes for venous blood specimen

2018 - 04 - 27 發(fā)布 2018 - 11 - 01 實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì) 發(fā) 布

前言

WS/T 224—2018

I

1 范圍

 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了真空采血管性能要求及驗(yàn)證方法。 

本標(biāo)準(zhǔn)適用于臨床實(shí)驗(yàn)室在正式使用新采血管前對(duì)其進(jìn)行性能驗(yàn)證。對(duì)正在使用的采血管的檢測(cè)結(jié) 果有疑問、查找原因可能與采血管相關(guān)時(shí)，也可采用本標(biāo)準(zhǔn)對(duì)采血管進(jìn)行性能驗(yàn)證。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3 術(shù)語(yǔ)和定義

 下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。 

在一個(gè)標(biāo)本采集管中，添加的任何促進(jìn)一個(gè)預(yù)定功能(如防止凝血或糖酵解)的試劑。注:盡管容器蓋不被認(rèn)為是一種添加劑，但它可能含有或涂覆添加劑，若它們進(jìn)入標(biāo)本中接觸，應(yīng)被認(rèn)為是添加劑。

 檢測(cè)結(jié)果的預(yù)期值與可接受值之間的差異。 

WS/T 224—2018

真空采血管的性能驗(yàn)證

1

WS/T 224—2018注:管蓋的作用使采血后容器的口部與外界形成隔離以確保安全，一般管蓋內(nèi)部還有一個(gè)能與容器口部形成密封的

密閉容器的組件。塞體以保護(hù)血樣，本標(biāo)準(zhǔn)稱其為管蓋而不稱其為塞子，目的是突出其安全作用。

3.7

3.8

3.10

采血管附加物 receptacle accessory

生產(chǎn)者放于采血管內(nèi)部，以有助于采集、混合或分離樣品的部件。示例:放入血清或血漿采血管中的小型塑料惰性球(或分離膠)，用于離心后從血液中分離血清或血漿。

研究中實(shí)際觀測(cè)或調(diào)查的一部分個(gè)體。通過檢查、研究和分析樣本的特征來反映總體情況。

3.12

驗(yàn)證 verification

通過提供客觀證據(jù)對(duì)規(guī)定要求已得滿足的認(rèn)定。注:終端用戶(臨床實(shí)驗(yàn)室)有責(zé)任驗(yàn)證制造商生產(chǎn)的器械性能。

4 真空采血管的性能驗(yàn)證4.1 外觀

重量測(cè)定分析法 gravimetric analysis

通過稱重和校正液體的質(zhì)量密度測(cè)定液體體積的方法。注:本文件中，以1000mL水的質(zhì)量為1000g。

抽吸量 draw volume，DV

從靜脈穿刺處負(fù)壓吸至真空采血管中的血液的體積。注:在標(biāo)準(zhǔn)條件(溫度18°C~25°C，標(biāo)準(zhǔn)大氣壓)下，真空采血管采水到平衡時(shí)的總重量。

2

WS/T 224—2018試管應(yīng)透明，無異物;試管無變形和破損;標(biāo)識(shí)應(yīng)清晰(真空采血管標(biāo)簽及管蓋顏色國(guó)際通用標(biāo)準(zhǔn)

參見附錄A);管蓋無脫落;采血管內(nèi)的分離膠的膠體應(yīng)呈凝膠狀。

4.2 抽吸量4.2.1 要求

抽吸量應(yīng)準(zhǔn)確，抽吸量與公稱液體容量的相對(duì)偏倚應(yīng)在-10%~10%之間。

4.2.2 驗(yàn)證方法4.2.2.1 試劑

水，符合GB/T 6682的三級(jí)水的要求，溫度在18°C~25°C。

4.2.2.2 儀器

500mL燒杯;考察管;濾紙;分析天平;20G(內(nèi)徑38mm)標(biāo)準(zhǔn)雙向軟連接采血針。

4.2.2.3 取樣

采用一次抽樣方案取樣，隨機(jī)抽取30支，按照標(biāo)準(zhǔn)操作進(jìn)行采水，記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。

4.2.2.4 步驟(重量測(cè)定分析法)

1. a)  將 500mL 的燒杯裝滿水;

2. b)  將 1~30 支管進(jìn)行編號(hào)且稱重，這為采血管的初始重量，記為 Wi1，其中 i 為 1~30;

3. c)  將采血針的靜脈穿刺針(穿透一個(gè)純膠塞)浸入盛滿水的燒杯中，另一端的管塞穿刺針刺穿真 空采血管的膠塞進(jìn)行采水，保持采血管的高度與水液面的高度大致一致，采水達(dá)到平衡時(shí)拔管;

4. d)  依次將編號(hào)為 1~30 的采血管進(jìn)行采水，注意燒杯內(nèi)水的液面高度與采血管的液面高度保持在 同一水平線上;

5. e)  采水完畢，用濾紙吸取膠塞表面可能殘留的水分;

6. f)  然后將采水后編號(hào)為 1~30 的采血管進(jìn)行稱重，這是真空采血管采水后的重量，記為 Wi2，其 中 i 為 1~30;

7. 
   

   g)  抽吸量的計(jì)算見式(1):
   DV=( ?W i 2 - ?W i1 )/N ................................. (1)

   
   

   式中:

   Wi1----采血管的初始重量，單位為克(g);Wi2----采血管采水后的重量,單位為克(g);i ----自然數(shù)編號(hào)，范圍為1~30;

   
   

   DV----抽吸量，單位為克(g);
   N ----檢測(cè)對(duì)象的總量，即 N=30。注:本標(biāo)準(zhǔn)中，以 1000mL 水的質(zhì)量為 1000g。

   
   

8. h)  抽吸量與公稱液體容量之間的相對(duì)偏差(relative deviation，簡(jiǎn)寫為 RD)，其計(jì)算見式(2):3

NN i?1 i?1

WS/T 224—2018RD=(DV-NLC)/NLC×100% ................................. (2)

4.3 管體強(qiáng)度4.3.1 要求

采血管在水平式離心機(jī)下應(yīng)能承受 3000g 的相對(duì)離心力，即測(cè)試采血管在充裝水至刻度線的條件 下，用水平式離心機(jī)采用 3000g 的相對(duì)離心力，離心 10min 而不發(fā)生破裂或泄露。

4.3.2 驗(yàn)證方法4.3.2.1 試劑

水，符合GB/T 6682的三級(jí)水的要求，溫度在18°C~25°C。

4.3.2.2 儀器

500mL燒杯;水平離心機(jī)，最大能提供5000g相對(duì)離心力。

4.3.2.3 步驟

1. a)  隨機(jī)抽取 30 支采血管充裝水至刻度線，并保持采血管外觀干凈，無液體;

2. b)  將 30 支采血管放入水平離心機(jī)中，注意離心機(jī)的平衡;

3. c)  設(shè)置離心參數(shù)，當(dāng)轉(zhuǎn)速穩(wěn)定時(shí)的最大相對(duì)離心力為 3000g，離心時(shí)間為 10min(例:離心半徑 為 17cm，轉(zhuǎn)速為 4000r/min，離心 10min);

4. d)  離心機(jī)停止后，小心取出采血管;

5. e)  觀察采血管外壁是否有液體滲漏。

4.4 血清分離管纖維蛋白掛壁4.4.1 要求

按照 4.4.2.2 的步驟進(jìn)行測(cè)試，血清分離管離心后不應(yīng)出現(xiàn)纖維蛋白掛壁。注:若采用分離膠促凝管進(jìn)行測(cè)試時(shí)，可以增加評(píng)估分離膠的性能。

4.4.2 驗(yàn)證方法4.4.2.1 儀器

考察管;采血針;醫(yī)用消毒用具;40 個(gè)靜脈血標(biāo)本;水平離心機(jī);試管架。

4.4.2.2 步驟

1. a)  試驗(yàn)條件:溫度為 18°C~25°C，壓力為當(dāng)?shù)氐沫h(huán)境大氣壓;

2. b)  將采血管進(jìn)行編號(hào)，考察管依次為 1~40;

3. c)  按照標(biāo)準(zhǔn)的采血操作流程進(jìn)行采血，每個(gè)人采 1 支管，采血后立刻進(jìn)行搖勻(按照制造商規(guī)定 的搖勻次數(shù))，然后豎直放置在試管架上靜置;

4

1. d)  當(dāng)全部 40 個(gè)人采完血后，開始記時(shí);

2. e)  30min 后將 40 支管一次全部放入離心機(jī)中進(jìn)行離心操作;

4.5 溶血情況4.5.1 要求

按照 4.4.2.2 的步驟進(jìn)行測(cè)試，采血管采血后進(jìn)行離心，不應(yīng)出現(xiàn)溶血(排除臨床原因)。4.5.2 驗(yàn)證方法

1. a)  按照 4.4.2.1、4.4.2.2a)~f)的內(nèi)容進(jìn)行操作;

2. b)  離心觀察并記錄 40 支考察管的血清或血漿質(zhì)量情況。

4.6 抗凝管的凝血情況4.6.1 要求

按照 4.4.2.2 的步驟進(jìn)行采血，抗凝管中充分混勻的血液標(biāo)本在顯微鏡下觀察應(yīng)無凝塊。4.6.2 驗(yàn)證方法

1. a)  按照 4.4.2.1、4.4.2.2 a)~d)的內(nèi)容進(jìn)行操作;

2. b)  3h 后用顯微鏡對(duì) 40 個(gè)標(biāo)本進(jìn)行觀察是否有凝塊。

注:4.4~4.6三項(xiàng)指標(biāo)的評(píng)價(jià)可以結(jié)合臨床性能評(píng)價(jià)一起進(jìn)行測(cè)試。

4.7 無菌4.7.1 要求

真空采血管內(nèi)腔應(yīng)無菌，即按照 4.7.2.3 的步驟進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果判定為合格。

4.7.2 驗(yàn)證方法4.7.2.1 試劑

75%酒精溶液;75%酒精棉球;硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基;改良馬丁培養(yǎng)基;0.9%無菌氯化鈉溶液。

4.7.2.2 儀器

隔水式恒溫培養(yǎng)箱;生化培養(yǎng)箱;生物顯微鏡;自動(dòng)高壓滅菌器;電熱恒溫干燥箱;酒精燈;火機(jī); 鑷子。

4.7.2.3 步驟

a) 抽樣:任意抽取需考察的采血管 10 支;

b) 供試液的制備:含液體的采血管如凝血功能檢測(cè)管、血沉檢測(cè)管，以其管內(nèi)含有的液體為供試 液;不含液體的￠16mm×100mm 采血管用 5mL0.9%無菌氯化鈉溶液進(jìn)行振蕩溶解，作為供試液 備用;不含液體的￠13mm×100mm 的采血管用 4mL0.9%無菌氯化鈉溶液進(jìn)行振蕩溶解，作為供

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WS/T 224—2018試液備用;不含液體的￠13mm×75mm 的采血管用 3mL0.9%無菌氯化鈉溶液進(jìn)行振蕩溶解，作為

供試液備用;

c) 供試樣品的培養(yǎng):將供試液置于裝有硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基的容器中進(jìn)行培 養(yǎng);

1. d)  培養(yǎng)及觀察:上述含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定的溫度(細(xì)菌 30°C~35°C，真菌 23°C~28°C)培養(yǎng)14d。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。若出現(xiàn)異常時(shí)則每天上、下午各觀察一次。 如在加入供試品后或在培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng) 14d 后，不能從外觀上判斷有無菌 生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上，細(xì)菌培養(yǎng) 2d,真菌培養(yǎng) 3d，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁或斜面上有無菌生長(zhǎng);或用接種環(huán) 取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，進(jìn)行判斷是否有菌生長(zhǎng)。

2. e)  陰性對(duì)照:取同一批號(hào)空白硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基各一支作為陰性對(duì)照。陰 性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。

3. f)  陽(yáng)性對(duì)照:在生物安全柜操作，接種金黃色葡萄球菌至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，30°C~35°C培養(yǎng)18h~24h。用 0.9%無菌氯化鈉溶液制成小于 100CFU/mL 的菌懸液。菌懸液制備后保存在 2°C~8°C，24h 內(nèi)使用。接種 1mL 小于 100CFU 的金黃色葡萄球菌菌懸液于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中， 應(yīng)生長(zhǎng)良好。

4. g)  結(jié)果判定:當(dāng)供試品管液體均顯澄清，陰性對(duì)照管液體均顯澄清，陽(yáng)性對(duì)照管液體顯渾濁時(shí)供 試品管為合格;當(dāng)陰性對(duì)照管液體顯澄清，陽(yáng)性對(duì)照管液體顯渾濁，供試品管液體顯渾濁時(shí)供 試品管為不合格;當(dāng)陰性對(duì)照管液體顯渾濁或陽(yáng)性對(duì)照管液體顯澄清時(shí)，實(shí)驗(yàn)無效。

一般情況下，應(yīng)對(duì)臨床檢測(cè)報(bào)告上的檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行可比性驗(yàn)證，可優(yōu)先對(duì)附錄B中的檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行 驗(yàn)證。

4.8.2 確定用于檢測(cè)的檢測(cè)儀器

實(shí)施結(jié)果比對(duì)時(shí)，應(yīng)對(duì)用于檢測(cè)臨床樣本的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行可比性驗(yàn)證。

4.8.3 比對(duì)樣本4.8.3.1 樣本選擇

 采用來自于不同患者的臨床樣本作為比對(duì)樣本。 

4.8.3.2 樣本濃度水平

樣本濃度應(yīng)在方法的線性范圍內(nèi)，并覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平。分析樣本的濃度應(yīng)盡可能在線性范圍內(nèi)均 勻分布。

4.8.4 要求

可比性驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)滿足臨床需要，同時(shí)考慮檢測(cè)系統(tǒng)的性能狀況。 不同項(xiàng)目分析質(zhì)量要求可采用國(guó)家認(rèn)可機(jī)構(gòu)設(shè)置的分析質(zhì)量的最低標(biāo)準(zhǔn)。 采血管不同項(xiàng)目比對(duì)結(jié)果的相對(duì)偏倚若符合分析質(zhì)量要求，表明考察管可滿足臨床應(yīng)用要求。

6

4.8.5 驗(yàn)證方法4.8.5.1 采血管選擇

只需使用兩種不同的采血管一個(gè)批號(hào)的產(chǎn)品同時(shí)采血進(jìn)行實(shí)驗(yàn),一種是比對(duì)管，一種是考察管。

4.8.5.2 樣本要求

至少分析20個(gè)不同的臨床患者樣本。只有在室內(nèi)質(zhì)控合格的情況下，實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)才有效。

4.8.5.3 線性回歸分析4.8.5.3.1 擬合線性回歸方程

以比對(duì)管的檢測(cè)值為X，考察管的檢測(cè)值為Y進(jìn)行線性擬合。利用所有樣本測(cè)定的有效數(shù)據(jù)，線性回 歸方程見式(3):

式中:b----直線的斜率;a----直線的截距;X----比對(duì)管的檢測(cè)值;Y----考察管的檢測(cè)值。

4.8.5.3.2 計(jì)算線性回歸相關(guān)系數(shù)

Y=bX+a ......................................... (3)

利用所有樣本測(cè)定值進(jìn)行線性回歸后得相關(guān)系數(shù)(以r或R2表示)。

4.8.5.3.3 線性回歸相關(guān)系數(shù)判定

如果r≥0.975(或R2≥0.95)，則認(rèn)為選擇的數(shù)據(jù)范圍適合，數(shù)據(jù)滿足要求。該分析的誤差可以由數(shù) 據(jù)范圍給以適當(dāng)補(bǔ)償，并且可以采用簡(jiǎn)單的線性回歸方程來評(píng)價(jià)斜率和截距。

如果R2<0.95，那么必須通過分析另外一些樣品以擴(kuò)大數(shù)據(jù)范圍，然后再檢查全部數(shù)據(jù)系列，如仍 然R2<0.95，則應(yīng)尋找待評(píng)價(jià)方法存在的缺陷，糾正后重新進(jìn)行試驗(yàn)。

4.8.5.4 相對(duì)偏倚的計(jì)算及判定4.8.5.4.1 相對(duì)偏倚的計(jì)算

將醫(yī)學(xué)決定水平(以Xc表示)代入式(3)，得到預(yù)期偏倚(以Bx表示),其計(jì)算見式(4):Bx=a+(b-1)Xc ..................................... (4)

式中:Xc----醫(yī)學(xué)決定水平;Bx----預(yù)期偏倚;

Rb=Bx/Xc×100% ...................................... (5)

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Rb----相對(duì)偏倚。

4.8.5.4.2 相對(duì)偏倚的判定

不同檢測(cè)項(xiàng)目的相對(duì)偏倚應(yīng)符合國(guó)家認(rèn)可機(jī)構(gòu)設(shè)置的分析質(zhì)量的最低標(biāo)準(zhǔn)。

4.8.6 可比性驗(yàn)證結(jié)果不符合要求的處理措施

對(duì)于不符合可比性驗(yàn)證要求的采血管，應(yīng)分析原因，必要時(shí)采取相應(yīng)的糾正措施，其后應(yīng)對(duì)其進(jìn)行 比對(duì)，確認(rèn)比對(duì)結(jié)果符合分析質(zhì)量要求。

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AA

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